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波叔一波中特彩图 图:尼康显微镜相差板的标本对比配置的影响

2014-10-15  发布者:admin 

  环绕的传输延迟性能(衍射)中光通过相差显微镜相差板环能显著影响整体标本的对比观察。 这种互动教程探讨对比度变化引起的改变相板的吸收和迟滞特性。

与随机选择的样本图像出现在初始化教程 相差对比图像 在右手侧窗的教程。 每个标本用于本教程是比较厚的显示器的对比度的影响是依赖于物镜相差板配置。 为了操作的教程,使用 相差对比模式 滑块来改变,与一个标准的黑暗之间观察到标本对照(低 DL )和高浓度(高密度的黑暗中(中性) DM )相差板。

当滑块转换,相差 板(以上滑块)变暗表明减少传输延迟性能,和许多标本进行对比的变化特征。 在某些情况下,对比度反转发生(通常表现在黑暗的地区出现更加明亮)出现在标本相差 对比图像 窗口。 试样的对比变化将滑块同时产生,波的振幅图,直接定位的相差板的上面,展示在环绕波振幅降低(红色曲线)的变化相对于所得到的(或颗粒,绿色曲线)波。 光的衍射波的振幅保持不变,不 管的相差板的特点,是由蓝色曲线表明。

在光传输和物镜相板的延迟值的变化可以产生广泛的影响,在非常低的对比度(接近明场照明)的一个伪暗视野的影响。 对于大多数标本,最好的结果介于两个极端之间,对折射率和厚度的整个试样脉动值的亮度,平滑的灰度生产。 此外,薄的标本往往会以不同的方式比较厚的标本,观察时,在相同的延迟(或环绕波的进步)和相差板的中性密度(传输衰减)值。

本教程比较常见的两种物镜相板构型的影响。 暗相差板( DL )规范是一个四分之一波长延迟值和中性密度平均水平的生产,导致试样的对比,落在中间的范围。 DL物镜产生浅灰色背景暗图像的轮廓,并利用通用的相差对比观察典型的物镜。 这些物镜的物镜是提供在与周围介质的折射率的一个主要区别标本中最强的暗对比。 DL相对比的物镜是用于细胞和其他半透明的生活资料的审查最流行的款式,特别适合于显微数字成像。

另外, 暗( DM )相差板配置有一个较小的环绕波的延迟值(约八分之一个波长),但更高的中性密度比暗低板。 暗的相差板生产中灰色背景暗图像的轮廓。 这些物镜是设计用来与具有小的相移和折射率的差异的标本实现高图像对比度,如细纤维,鞭毛,纤毛,颗粒,和非常小的颗粒。 通常限制在高放大倍率的物镜具有大的数值孔径(萤石和消色差透镜),用非常薄的标本进行DM相对比,但往往显示一个反转的对比时,厚的样品(标本具有非常高的折射率)成像。

在相差显微镜下观察图像强度(或记录或数字或与传统的电影)不承担一个简单的线性关系,对试样的光学路径差。 这个概念是如图1所示,它显示相对试样强度作为阳性对照的相差板有一个固定的延迟值的函数的相差变化(90度)和不同程度的中性密度。 红色曲线与 暗( DM )物镜,而黄色曲线接近黑暗的低( DL )物镜。 蓝色曲线提出了一种无中性密度相差板加,和模仿的明物镜在90度的相差变化(见图1)。 标本陷入图1的灰色区域比背景暗,和那些在白色区域比背景更轻。

对比的是更大的在较小的光程差与具有较高的中性密度值的物镜(红色曲线;DM物镜),但较厚的标本进行对比度反转在低得多的路径的差异(约50度延迟)。 作为一个结果,解释图像可以用厚的样品,当采用暗介质相对比的物镜是困难的。 例如,精细胞的纤毛具有折射率只比周围介质略高(约15度延迟)将出现深灰色。 然而,较厚的特点,如细胞核或较大的细胞器,具有延迟值的百分之60左右,经验对比反演和出现在黑暗的背景很亮。 检查时具有中性密度百分之25相差物镜(黄色曲线),同一标本有一个细胞核,比纤毛深。 戏剧性的对比这些差异可能导致细胞形态完全不同的解释。



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