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波束一波中特:徕卡显微镜填充和组装不同制造商高压凝冻的视频教程

2014-12-09  发布者:admin 

高压冷冻(HPF)是一种低温定影法主要用于生物样品,但也适用于各种非生物材料。它是能产生最佳保存在许多细胞类型和组织中或在有机和无机复合材料的技术。最常见的是,高压冷冻样品用经适当处理的光或电子显微镜进一步分析。为解决该采用HPF应用过多,有各种样品的载体和试剂盒的系统。成功冷冻的一个重要方面是正确的和快速的处理样品之前实际冻结。一个方面是不同的载流子的填充和组装。


一波中特打一肖EM HPM100扁试样系统

徕卡显微镜这个系统是最常用的,它存在于两个变体:平检体系统适用于3 mm的载体和用于6毫米载体。它适合的利用不同的培养细胞类型,细菌,藻类,动物和植物组织,等。样品冻结在平板样品载体通常进一步在冷冻置换部和树脂嵌入处理的冷冻应用的阵列。

良好的冷冻样品需要仔细地选择冷冻冷冻?;?填充剂和特定的处理之前,以确保样品的最佳的生理状态,以及正确的处理,将来自抽样变化进行采样。我们不会详细说明这些细节,但我们必须强调其重要性,并强烈建议进一步阅读关于这个问题的。  

填补了运营商的时候简单的规则:

避免过满或欠填充作为运营商既会导致较差的冷冻效果。

避免样品的机械损伤却使载体,因为这会导致次优的质量

总是试图找到样本量和载大小之间的最佳关系。

定时是必要的。样品操纵应减少到可能的最低水平。

徕卡EM HPM100管系统

管系统适合于在悬浮液中的样品,但它主要是用于CEMOVIS应用(低温电子显微玻璃体部分中)。这种方法允许样本完全水合和最小的,接近无分子聚合的研究。因此,当涉及到他们的原生状态解决的分子结构是首选的方法。对于这个特定的应用程序将样品刚好冻结之前与葡聚糖混合,以20%的终浓度。

一旦冻结的样品可以被修整(铜容易被金刚石刀修整而不引起任何损害)并切片在冷冻超薄切片。有关详情请参阅“简介高压冻结”。

填充管时,简单的规则:

避免气泡被截留,因为这会损害冷冻结果

避免保持样品葡聚糖混合物太长冻结,因为这将导致在干燥的工件之前,并且影响样品的生理状态。

蓝宝石系统6毫米徕卡EM HPM100

蓝宝石光盘适合贴壁单层或CLEM(相关光学和电子显微镜)的应用研究。蓝宝石具有优异的热性能,是光镜观察或光刺激的应用非常方便。

填充管时,简单的规则:

避免气泡组装两个蓝宝石的时候,因为这会损害冷冻效果,并可能导致蓝宝石粉碎被困。

避免保持准备蓝宝石样本蓝宝石组件太长冻结,因为这将影响样品的生理状态之前。

确保载体的细胞被标记以适当的方式(例如,碳涂覆的图案),所以它可以很容易地在冷冻后和进一步加工期间进行区分的蓝宝石

确认

我们感谢渡边茂树,美国犹他州大学的博士,他对影片的贡献。





沪公网安备 31011202003519号

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